目的 观察抑制含溴结构域和ET 域(BET)蛋白能否影响结肠癌细胞的有氧糖酵解,并进一步探讨其影响机制是否通过下调哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路活性实现。
方法 选择人结肠癌RKO、LS174T、HCT116细胞株。实验分成DMSO 组和JQ1组。DMSO 组分别于RKO、LS174T、HCT116细胞株中加入溶媒DMSO 处理,JQ1 组分别于RKO、LS174T、HCT116 细胞株中加入BET 蛋白抑制剂JQ1(将1μmol/LJQ1溶于DMSO 中)处理,每组每个细胞株设3个副孔。测定两组各细胞株的乳酸含量和计算糖耗量,通过细胞计数观察RKO 细胞的增殖密度。为研究JQ1 能否协同低糖环境发挥其效应,另取未经处理的HCT116 细胞株加入低糖DMEM 培养基(葡萄糖浓度6.1 mmol/L)中培养,进行细胞计数。采用Western 印迹法测定mTOR 下游蛋白表达情况。
结果 JQ1 组RKO、LS174T、HCT116 细胞株的乳酸含量和糖耗量均显著低于
DMSO 组同细胞株(犘值均<0.01)。JQ1组RKO 细胞株和LS174T 细胞株的细胞计数均显著少于DMSO 组(犘值均<0.01)。高糖或低糖培养基中,JQ1 组HCT116 细胞株的细胞计数均显著少于DMSO 组(犘值均<0.05)。光学显微镜下见,JQ1组RKO 细胞增殖密度明显减少。Western印迹法结果显示,JQ1组RKO 细胞株mTOR 下游蛋白(抗磷酸化的核糖体S6蛋白)、HCT116细胞株mTOR 下游蛋白(抗磷酸化的核糖体S6蛋白、抗4E 结合蛋白1、抗S6蛋白激酶1蛋白)表达的灰度值均显著低于DMSO 组(犘值分别<0.05、0.01)。
结论 抑制BET 蛋白可能通过抑制mTOR 通路影响结肠癌细胞有氧糖酵解,从而抑制结肠癌细胞增殖。