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目的 探究心肌细胞系H9c2在缺氧-复氧(H/R)后自噬与线粒体缝隙连接蛋白43(Cx43)的变化,以及两者间的相互关系。方法 通过缺氧处理12h、复氧处理12h建立H9c2细胞H/R 模型。将H9c2细胞随机分为5组:对照组、H/R 组、格尔德霉素(GA)组、3-甲基腺嘌呤(3-MA)组、GA+3-MA 组。应用线粒体膜电位检测试剂盒检测各组线粒体膜电位,细胞计数试剂盒(CCK-8法)检测各组细胞活力,采用Western印迹法检测各组Beclin-1、LC3B、线粒体Cx43和磷酸化Cx43(p-Cx43)的蛋白质水平;应用电子显微镜观察各组自噬体情况。结果 H/R 组的细胞活力显著低于对照组(P<0.01),乳酸脱氢酶(LDH)水平显著高于对照组(P<0.01),H-R 模型建立成功。H/R 组的线粒体膜电位、细胞活力均显著低于对照组(P值均<0.05);GA组、3-MA 组和GA+3-MA 组的线粒体膜电位、细胞活力为均显著低于H/R 组(P值均<0.05);GA+3-MA 组线粒体膜电位、细胞活力均分别显著低于GA组和3-MA 组(P值均<0.05)。H/R 组自噬相关蛋白质Beclin-1水平和LC3BⅡ/LC3BⅠ分别为0.89±0.05和4.37±0.50,均显著高于对照组的0.26±0.03 和0.77±0.09(P值均<0.05);与H/R 组相比,GA组、3-MA 组和GA+3-MA 组的Beclin-1水平(0.75±0.06、0.47±0.03、0.31±0.02)、LC3BⅡ/LC3BⅠ(3.29±0.18、1.37±0.09、0.85±0.14)均显著降低(P值均<0.05);GA+3MA 组的Beclin-1水平、LC3BⅡ/LC3BⅠ又显著低于GA和3-MA 组(P值均<0.05)。H/R 组线粒体Cx43和p-Cx43蛋白质水平分别为0.75±0.03 和0.41±0.03,均显著低于对照组的0.86±0.02 和0.58±0.01(P值均<0.05);GA 组、3-MA 组和GA+3-MA 组的线粒体p-Cx43 蛋白质水平分别为0.27±0.06、0.33±0.05、0.18±0.04,均显著低于H/R 组(P值均<0.05);GA组和GA+3-MA 组的线粒体Cx43 蛋白质水平(0.62±0.09、0.59±0.07)均显著低于H/R 组(P值均<0.05);GA+3-MA 组的线粒体p-Cx43蛋白质水平显著低于GA 组和3-MA 组(P值均<0.05)。结论 H/R 引起的线粒体Cx43含量下降和脱磷酸化增加可能是缺血-再灌注损伤发生的重要机制。自噬参与线粒体Cx43磷酸化状态的维持,线粒体Cx43特别是p-Cx43也参与了自噬的激活过程,对H/R 心肌起保护作用。
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