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人MEF2a病毒载体构建及嗜铬细胞瘤PC12稳转细胞系的建立和鉴定

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DOI:
作者:
陆菡，于布为
Lu Han，Yu Buwei
作者单位:
上海交大医学院附属瑞金医院麻醉科
Dept of Anesthesiology, Ruijin Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, Shanghai 200025
关键词:
肌细胞增强因子2；PC12细胞；逆转录病毒；稳定转染；神经系统相关疾病
摘要:
目的: 构建表达MEF2A基因的逆转录病毒载体，并观察稳定感染PC12细胞后MEF2A蛋白表达情况。 方法：用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切pcDNA3-MEF2a-Flag质粒，得到MEF2-Flag基因的编码序列，定向插入到pBabe-puro载体中，经扩增，筛选阳性克隆，酶切和测序验证后，转染293T细胞进行病毒包装、扩增、纯化后获取逆转录病毒颗粒。将逆转录病毒颗粒感染PC12细胞，经嘌呤霉素筛选后抗性克隆集落长出。Western检测MEF2-Flag的表达情况。 结果：连接重组后经酶切和测序筛选出pBabe-MEF2A-flag；稳定转染的PC12细胞系经Flag和MEF2抗体证明两者表达均明显增强。 结论：成功构建了pBabe-MEF2A-flag逆转录病毒载体，并建立了其稳定转染的PC12细胞系。

 

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